SARS-CoV-2 nukleorūgščių tyrimo rinkinys

Paskirtis:

SARS-CoV-2 Nukleino rūgščių tyrimo rinkinys skirtas kokybiniam COVID-19 nukleino rūgšties aptikimui nosiaryklės, burnos ir ryklės tepinėlių ir skrepliuose. Tyrimo rezultatai yra molekulinės infekcijos arba įtariamų pacientų diagnostikos pagrindas ir neturėtų būti naudojami kaip vienintelis klinikinės diagnozės kriterijus.

Medžiagos:

Bandymo procedūra:

A. Mėginio paruošimas

Išskirta RNR yra SARS-CoV-2 nukleorūgščių tyrimo rinkinio pradinė medžiaga.

Svarbu: kiekviena nukleino rūgščių ekstrahavimo procedūra turi būti atliekama vienu metu su viena teigiama kontrole (40 μL, atskieskite steriliais fiziologiniais tirpalais/PBS iki norimo tūrio) ir viena neigiama kontrole (40 μL, praskieskite steriliais druskos tirpalais/PBS iki norimo tūrio).

Rekomenduojama naudoti šiuos komercinius nukleorūgščių ekstrahavimo rinkinius: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Viral RNA Mini rinkinys (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA Kit (TIANGEN);

B. Reakcijos mišinio nustatymas

1. Prieš naudojimą visi reagentai ir mėginiai turi būti visiškai atšildyti, visiškai sumaišyti ir trumpai centrifuguoti kambario temperatūroje (maždaug nuo 18 iki 25 laipsnių).

2. Paruoškite reikiamą reakcijos mišinio tūrį tinkamo dydžio polipropileno mikrocentrifugos mėgintuvėlyje.

3. Pipete įlašinkite 25 µL reakcijos mišinio į kiekvieną reikiamą atitinkamo optinio 96-šulinėlio reakcijos plokštelės arba atitinkamo optinio reakcijos mėgintuvėlio šulinėlį.

C. Šablono pridėjimas

1. Įpilkite 5 μL ekstrahuotos RNR iš mėginių / teigiamos kontrolės / neigiamos kontrolės. Bendras tūris yra 30 μL.

2. Kruopščiai sumaišykite mėginius ir kontrolę su reakcijos mišiniu pipete aukštyn ir žemyn / sūkuriu.

3. Uždarykite 96-šulinėlių reakcijos plokštelę atitinkamais dangteliais arba optine lipnia plėvele, o reakcijos vamzdelius atitinkamais dangteliais.

4. Centrifuguokite 96-šulinėlių reakcijos plokštelę centrifugoje su mikrotitravimo plokštelės rotoriumi 30 sekundžių maždaug 2500 aps./min.

D. Realaus laiko PGR instrumento programavimas

Pagrindinės informacijos apie skirtingų realaus laiko PGR prietaisų sąranką ir programavimą rasite atitinkamo prietaiso vartotojo vadove. Tyrimas buvo optimizuotas ABI7500 Real-Time PGR sistemai. PGR paleidimas atliekamas ciklo sąlygomis, kaip aprašyta toliau esančioje lentelėje.

Apibrėžkite fluorescencijos detektorius

*Prašome nustatyti vidinę instrumento fluorescencijos nuorodą į „Nėra“, pavyzdžiui: ABI serijos prietaisams „Passive Reference“ nustatykite į „Nėra“.

E. Duomenų analizė

Nustatykite analizės parametrus ir analizuokite duomenis pagal atitinkamų prietaisų naudojimo instrukcijas.

Paimkite ABI 7500 kaip pavyzdį:

Pradinė linija turėtų būti nustatyta į diapazoną, kuris pašalina fono fluorescenciją, aptinkamą ankstyvuosiuose stiprinimo ciklus, bet nepersidengia su sritimi, kurioje stiprinimo signalai pakyla virš fono (pradžios vertė: 3–10; pabaigos vertė: {{2} }). Ciklo slenkstis (Ct) turėtų būti eksponentinės fazės bazėje. Spustelėkite „Analizė“, kad automatiškai gautumėte analizės rezultatą, ir skaitykite aptikimo rezultatą lange „Ataskaita“.

Populiarus Žymos: sars - cov-2 nukleino rūgštis bandymas komplektas, Kinija, tiekėjai, gamintojų, gamykla, urmu